文章標(biāo)題：LC-MS/MS法定量測(cè)定人血漿中的羧甲基賴氨酸和羧乙基賴氨酸，并對(duì)檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行臨床衰老研究分析應(yīng)用

客戶單位：航空總醫(yī)院/北京醫(yī)院

匯智泰康提供服務(wù)：建立和驗(yàn)證CML和CEL的含量檢測(cè)的LC-MS/MS方法，完成上千例人血漿中CML和CEL的含量檢測(cè)

文章概要：

【研究背景】

醫(yī)學(xué)研究表明，隨著年齡的增長(zhǎng)，晚期糖基化終末產(chǎn)物（AGEs）能夠在血清、組織中生成和積聚，并參與糖尿病慢性并發(fā)癥、動(dòng)脈粥樣硬化、尿毒癥、阿爾茨海默病、白內(nèi)障等多種疾病和衰老的發(fā)生和發(fā)展。評(píng)價(jià)AGEs對(duì)人類健康的影響，需要準(zhǔn)確可靠的方法對(duì)適合的生物標(biāo)志物進(jìn)行測(cè)定。目前已發(fā)現(xiàn)的AGEs有20多種，包括羧甲基賴氨酸（Nε(Carboxymethyl)lysine，CML），羧乙基賴氨酸（Nε-(Carboxyethyl)lysine，CEL），吡咯素（pyrraline）和戊糖素（pentosidine）等。CEL和CML與衰老以及疾病密切相關(guān)，如糖尿病并發(fā)癥和腎衰竭等。建立一個(gè)高效準(zhǔn)確的定量方法對(duì)CML和CEL等含量進(jìn)行測(cè)定，對(duì)臨床進(jìn)一步研究CML和CEL與年齡的相關(guān)性，評(píng)估人群的健康狀態(tài)等具有重要的意義。

國(guó)內(nèi)外對(duì)生物樣本中CML和CEL的測(cè)定方法有色譜分析法、酶聯(lián)免疫吸附劑測(cè)定法等，但這些方法都存在一定的局限性，如操作復(fù)雜，費(fèi)時(shí)費(fèi)力，靈敏度低等。本實(shí)驗(yàn)擬建立高效、靈敏、準(zhǔn)確、專屬性強(qiáng)的LC-MS/MS方法，并用于測(cè)定人血漿中CML和CEL的含量。

【研究方法】

人血漿樣本經(jīng)全氟戊酸水溶液孵化，三氯乙酸沉淀，鹽酸水解，氮?dú)獯蹈桑詈笫褂萌焖崴芤簭?fù)溶，過(guò)濾后，同時(shí)加入Cotinine-D₃作為內(nèi)標(biāo)，選用Agela Venusil ASB C₁₈色譜柱（50 mm ×4.6 mm，5 μm），以5 mmol·L-1 全氟戊酸水溶液-含0.15%甲酸的乙腈：水=60:40（v/v）為流動(dòng)相進(jìn)行分離；選用多重反應(yīng)監(jiān)測(cè)（MRM）掃描方式進(jìn)行監(jiān)測(cè)CML、CEL和Cotinine-D₃，選擇監(jiān)測(cè)離子對(duì)分別為：CML選用m/z 205.2-->84.1（定量）和m/z 205.2-->m/z 130.0，CEL選用m/z 219.1-->84.1（定量）和m/z 219.1-->m/z 130.1，Cotinine-D₃選用m/z 180.1-->80.1。

【研究結(jié)果】

CML和CEL分離的總時(shí)間在6分鐘內(nèi)完成。CML，CEL和Cotinine-D₃的保留時(shí)間分別為3.43min，3.46 min和4.50 min；血漿中CML和CEL的線性范圍均為0.025~1.500 μmol·L-1，定量下限：CEL和CML均為 0.025μmol·L-1；日內(nèi)、日間相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）均低于9%；相對(duì)偏差（RE）均在±4%的范圍以內(nèi)。平均提取回收率：CML為94.24%，CEL為：97.89%。

【研究結(jié)論】

結(jié)果表明，該方法快速、靈敏高、專屬性強(qiáng)、重現(xiàn)性好，適用于臨床人血漿樣本中CML和CEL的快速檢測(cè)；臨床增齡研究項(xiàng)目結(jié)果表明，該兩種指標(biāo)對(duì)于人的衰老研究具有重要的指征意義。

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